# 经验沉淀 · 待提炼

- 开始时间：2026-09-10
- 状态：已收齐，提炼中
- 主题：宁波海尔施（预研）· Tth酶体系单管测试全程

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## 一、文本消息

老师，我们预计给您发这三个体系，您可以一起测试一下：
MD6104-020322（双酶体系）、
M5101-136105（利用锰离子的Tth酶体系）、
M5341-014801-DB（不利用锰离子的Tth酶体系）
体系已经收到，近期会安排测试。我看你们Tth酶反应试剂说明书上的反转录温度为60度，这个温度能否调低些？因为我的引物Tm值没这么高。

## 二、聊天记录截图（13 张，按时间序）

【图1 · 7月27日 11:30】匡婷 问"您的逆转录温度大概是多少"，K牛凯-宁波海尔施（预研）回"58度左右"；匡婷说"我们这边测试过最低的逆转录温度56度可以的"，对方"那可以的"。K牛凯撤回一条消息。

【图2 · 7月27日 11:55】牛凯问 56°C 逆转录时间是否和 60°C 类似；匡婷回复基于靶标测试 56°C 可以逆转录。牛凯致谢。

【图3 · 8月4日 09:31】K牛凯称测试了四组引物，Tth酶体系扩增效果都不太理想；匡婷问项目是否必须用Tth体系，并解释该体系对引物探针要求：Tm值要比双酶体系高，因为Tth逆转录温度在60-65℃，效果会更好。

【图4】K牛凯问上次寄来测试的014801是否有货号、想采购；匡婷回复货号 M5341-014801-DB。

【图5 · 9月3日 09:12】报价：100T/包（50ul体系）5.5元/T，1000T打7折，1万T以上继续折扣；K牛凯回"omg 这么贵"；解释"算成25的体系价格就减半了呀"；匡婷补充"老师，目前这个体系做单管效果不好，我们内部也还在进行优化"。

【图6】匡婷问 K牛凯 对单管稳定性的具体要求，对方答"37度7天"。匡婷追问是否必须用Tth酶体系、普通双酶体系是否可接受。

【图7 · 9月3日 10:02】讨论双酶逆转录定量体系。K牛凯称逆转录酶未封闭，加样后不及时扩增可能影响定量；匡婷回复：M5341-014801-DB酶搭配其他buffer做过单管验证，37℃加速7天部分低浓度靶标荧光值下降30%以上，14天部分靶标滞后且荧光值下降，仍在优化；建议尝试单管37℃加速验证；若尝试需换双抗修饰酶，目前体系内为单抗修饰。

【图8 · 9月10日 13:36-13:42】牛凯问某组分基础配方和浓度，称测试性能未达预期、想调整buffer；引用"匡婷: M5341-014801-DB"；匡婷回"牛老师，这次结果有好转呀？""有哪个点需要再强化"。

【图9】K牛凯写"低浓度样本的稳定性较差"。附两张 qPCR 扩增曲线（Rn vs 循环数1-45）：曲线约31-33循环才起，且分散、平台期高度不一——低浓度模板重复性差。

【图10】匡婷@牛老师要体系配制表；K牛凯发来：宝锐014801为1×（μL），5×Buffer 12 μL、25×Enzyme 2.4 μL、引|探mix 0.6 μL、Total 15 μL、核酸 45 μL。匡婷"好的"。

【图11】匡婷问低浓度样本重复性是否差，K牛凯确认低浓度样本稳定性差；匡婷问是否做了简单体系调整（如增加酶组分）。

【图12】匡婷提两个方案：①发 M5341-014801-DB 拆分体系，镁离子浓度 2-3 mM、最高不超过 3.5 mM；②酶组分加添加剂。对方追问最终组分是否"酶（含添加剂）、镁离子、含其他组分的buffer"三部分。

【图13】确认试剂组分三个：酶（含添加剂）、镁离子、含其他组分的buffer；对方"是的""好的，可以"。9月10日 15:18 匡婷称预计下周三发货，15:41 牛凯回表情。